Solo per uso diagnostico in vitro e professionale.
Nome
Kit per test ELISA IgG anti-Ct (Siero/Plasma)
USO PREVISTO
Questo kit è un test qualitativo per la rilevazione di anticorpi IgG contro Chlamydia trachomatis (Ct) nel siero/plasma umano. Il kit è
adatto per lo screening clinico e la diagnosi di infezione da Ct nel siero/plasma.
PRINCIPIO DEL TEST
L'antigene Ct è adsorbito in fase solida sulla microplacca di reazione in polistirene. Se nel campione di test è presente l'anticorpo IgG anti-Ct
questo si lega all'antigene Ct rivestito nella microplacca, formando un complesso antigene-anticorpo, e successivamente
si lega all'anticorpo anti-enzima marcato formando un complesso antigene-anticorpo-anticorpo sulla superficie
della microplacca, e visualizza un colore blu nel pozzetto corrispondente tramite l'azione del substrato. Pertanto, può
rilevare specificamente gli anticorpi IgG anti-Ct nel siero/plasma umano.
PROCEDURA DEL TEST
1. Equilibrare tutti i reagenti a temperatura ambiente per 15 minuti prima dell'uso.
2. Diluire il tampone di lavaggio nel rapporto di 1:40 con acqua distillata prima dell'uso.
3. Aggiungere 100 µL di diluente per campioni nei pozzetti corrispondenti (Non aggiungere nei pozzetti di bianco, nei pozzetti di controllo negativo e nel pozzetto di controllo positivo). Il campione deve corrispondere al numero di micro
piastre, ogni piastra deve essere fornita con 2 pozzetti di controllo negativo, 1 pozzetto di controllo positivo e 1 pozzetto di controllo di bianco.
Aggiungere 5 µL di campione nel pozzetto corrispondente, mescolare accuratamente usando la pipetta, aggiungere
50 µL di controllo negativo e controllo positivo nei pozzetti di controllo negativo e nel pozzetto di controllo positivo (Non
aggiungere nel pozzetto di bianco).
Nota: Utilizzare una punta di pipetta usa e getta separata per ogni campione, controllo negativo e controllo positivo per
evitare contaminazioni crociate.
4. Agitare delicatamente per mescolare per 30 secondi. Incubare a 37°C per 20 minuti con la membrana di sigillatura della piastra
sigillando la piastra.
5. Al termine dell'incubazione, rimuovere e scartare la copertura della piastra. Prelevare, aggiungere il tampone di lavaggio in
ogni pozzetto per 20 secondi. Ripetere 5 volte. Dopo il ciclo di lavaggio finale, capovolgere la piastra su
carta assorbente o asciugamano pulito e picchiettarla per rimuovere eventuali residui.
6. Aggiungere rispettivamente 50 µL di coniugato enzimatico (Non aggiungere nel pozzetto di bianco)
7. Incubare a 37°C per 20 minuti con la membrana di sigillatura della piastra sigillando la piastra. Ripetere il
passaggio di lavaggio per 5 volte come al punto 5.
8. Aggiungere 50 µL di Substrato A e 50 µL di Substrato B (Non aggiungere nel pozzetto di bianco). Incubare a 37°C per
10 minuti con la membrana di sigillatura della piastra sigillando la piastra.
9. Aggiungere 50 µL di Soluzione di Arresto in ogni pozzetto (Non aggiungere nel pozzetto di bianco). Mescolare delicatamente agitando, leggere l'assorbanza entro 10 minuti dall'arresto della reazione. Calibrare il lettore di piastre con il pozzetto di bianco e leggere l'assorbanza a 450 nm. Se si utilizza uno strumento a doppio filtro, impostare la lunghezza d'onda di riferimento a 630 nm. Non è consentito alcun pozzetto di bianco se si utilizza la doppia lunghezza d'onda per la rilevazione. Calcolare il
valore di cut-off e valutare i risultati.
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Cronometria: Leggere la densità ottica (OD) del campione a 450 nm con un lettore di micropiastre.
Se il valore medio di OD del controllo negativo è ≤ 0,1 e il valore medio di OD del controllo positivo è ≥ 0,8, il test è valido,
altrimenti il test non è valido.
Valore di Cut-Off (C.O.) = Il valore medio di OD del controllo negativo x 3 (Calcolato come 0,10 quando il valore medio
di OD del controllo negativo è
< 0,10, calcolato con il valore effettivo quando il valore medio di OD del controllo negativo
è > 0,10)
Risultati Positivi: Valore OD del campione ≥ C.O.
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