Anti corredi della prova dell'anticorpo di Elisa Test Kit Anti TPO della perossidasi della tiroide

Perossidasi anti--TPO Elisa Kit di antitiroide

1. Uso progettato

Dosagggio immunologico per la determinazione quantitativa in vitro degli anticorpi alla perossidasi della tiroide in siero umano. L'anti determinazione del ‐ TPO è utilizzata come aiuto nella diagnosi delle malattie della tiroide autoimmuni.

2. Riassunto

• La perossidasi specifica del ‐ della tiroide (TPO) è presente sui microsomi dei thyrocytes ed è espressa alla sua superficie apicale delle cellule. Nella sinergia con tireoglobulina (Tg) questo enzima ha una funzione essenziale nello iodination della L tirosina del ‐ e l'accoppiamento chimico di mono ‐ ed iodotyrosine risultanti di di ‐ per formare gli ormoni tiroidei T4, T3 e pi3.
• TPO è un autoantigen potenziale. I titoli elevati del siero degli anticorpi a TPO sono trovati in parecchie forme di tiroidite causate dall'autoimmunità. L'alambicco ha trovato frequentemente che il termine «anticorpo microsomico» proviene dal tempo in cui TPO ancora non era stato identificato come antigene nell'autoimmunità causata dai microsomi. Nel senso clinico l'anti ‐ TPO di due termini e l'anticorpo microsomico possono essere usati sinonimo; ci sono differenze, tuttavia, riguardo ai metodi di prova.
• Gli alti anti titoli del ‐ TPO sono trovati in fino a 90% dei pazienti con le tiroiditi di Hhashimoto croniche. Nel morbo di Basedow, 70% dei pazienti hanno un titolo elevato. Sebbene la sensibilità della procedura possa essere aumentata simultaneamente determinando altri anticorpi della tiroide (anti ‐ Tg, anticorpo del ‐ del ricevitore del ‐ di TSH - TRAb), un'individuazione negativa non elimina la possibilità di una malattia autoimmune. La grandezza del titolo dell'anticorpo non correla con l'attività clinica della malattia. I titoli inizialmente elevati possono diventare negativi dopo i lunghi periodi della malattia o durante la remissione. Se gli anticorpi riappaiono la remissione seguente, quindi una ricaduta è probabile.
• Considerando che le prove microsomiche usuali dell'anticorpo impiegano i microsomi non purificati come preparato dell'antigene, le anti prove del ‐ TPO usano una perossidasi purificata. Le due procedure sono della prestazione comparabile in termini di sensibilità clinica, ma il migliore ‐ del lotto a consistenza del lotto del ‐ ed all'più alta specificità clinica può attendersi da anti ‐ TPO prova dovuto il più di alta qualità dell'antigene ha usato. L'enzima ha collegato le analisi dell'immunosorbente usa gli anticorpi anti-umani umani di IgG del coniglio e dell'antigene (anti--IgG).

3. Principio della prova

Metodo indiretto, durata totale dell'analisi: 70 minuti.

L'ELISA anti--TPO impiega la fase solida, metodo ELISA indiretto per rilevazione degli anticorpi a TPO nella procedura in due tappe di incubazione. Le strisce del microwell del polistirolo sono pre- ricoperte d'antigeni umani altamente immunoreactive di TPO. Durante il primo punto di incubazione, gli anticorpi specifici anti--TPO, se presenti, saranno limitati alla fase solida hanno ricoperto prima gli antigeni di TPO. I pozzi sono lavati per eliminare le proteine del siero non legate e gli anticorpi anti-umani di IgG del coniglio (anti--IgG) coniugati alla perossidasi del rafano degli enzimi (coniugato di HRP-) si aggiungono. Durante il secondo punto di incubazione, questi anticorpi HRP-coniugati saranno limitati a tutti i complessi dell'antigene-anticorpo (IgG) precedentemente si sono formati ed il HRP-coniugato non legato poi è rimosso lavando. Le soluzioni del cromogeno che contengono Tetramethylbenzidine (TMB) ed il perossido dell'urea si aggiungono ai pozzi e nella presenza di antigene-anticorpo-anti-IgG immunocomplex (HRP), i cromogeni incolori sono idrolizzati dal coniugato rilegato di HRP di un ad un prodotto colorato blu. Il colore blu ingiallisce dopo la fermata della reazione con acido solforico.

La quantità di intensità del colore può essere misurata ed è proporzionale alla quantità di anticorpo catturata nei pozzi ed alla quantità di anticorpo nel campione rispettivamente.

4. I materiali dei reagenti hanno fornito

• Microplate ricoperto, 8 X12 strisce, 96 pozzi. Ricoperto prima con l'antigene umano di TPO.

• Calibratori, 6 fiale, 1 ml ciascuno, pronte per l'uso; Concentrazioni: 0 (A), 25 (B), 50 (C), 100 (D), 250 (E) e 500 (F) UI/ml.

• Il coniugato degli enzimi, 1 fiala, 11,0 ml di HRP (perossidasi del rafano) ha identificato il coniglio anticorpi umani anti- di IgG (anti--IgG) nell'amplificatore Tris-NaCl che contiene BSA (albumina di siero bovino). Contiene 0,1% preservativi ProClin300.

• Diluente del siero: 1 fiala, 11mL. Contenere i tamponi e una tintura

• Concentrato della soluzione del lavaggio, 1 fiala, 25 ml (40X si è concentrato), soluzione del lavaggio della PBS-Tween.

• Substrato, 1 fiala, 11ml, pronto per l'uso, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Fermi la soluzione, 1 fiala, 6,0 ml di 1 acido solforico di mol/l.

• IFU, 1 copia.

• Coperchio del piatto: 2 pezzi.

Materiali richiesti (ma non fornito)

• Lettore di Microplate con capacità assorbente di lunghezza d'onda 450nm e 620nm.

• Rondella di Microplate.

• Incubatrice.

• Agitatore del piatto.

• Micropipette e micropipette multicanali che consegnano 50µl con una precisione di migliore di 1,5%.

• Carta assorbente.

• Acqua distillata

5. Metodo di prova

• Usi soltanto il numero dei pozzi richiesto e formatti i pozzi del microplate affinchè ogni calibratore e campione siano analizzati.

• Aggiunga il µL 100 dei calibratori ad ogni pozzo.

• Aggiunga il µL 100 del diluente del campione (colore verde) ad ogni pozzo eccetto i Calibratore-pozzi.

• Aggiunga il µL 10 del campione ad ogni pozzo del diluente del campione (NOTA: I reagenti in pozzi gireranno il colore blu da verde), quindi scuotono 30 secondi.

• Copra il piatto di coperchio del piatto ed incubi a °C 37 per 30 minuti.

• Scarti il contenuto di micro piatto dalla decantazione o dall'aspirazione. Se decantando, spilli e macchi l'essiccatoio a piatti con carta assorbente.

• Aggiunga il µL 350 della soluzione del lavaggio, decanti (rubinetto e macchia) o aspiri. Ripeti 4 volte supplementari per complessivamente 5 lavaggi. Alla conclusione del lavaggio, inverta il piatto e spilli tutta la soluzione residua del lavaggio su carta assorbente.

• Aggiunga il µL 100 del coniugato degli enzimi,

• Copra il piatto di coperchio del piatto ed incubi a °C 37 per 30 minuti.

• Aggiunga il µL 350 della soluzione del lavaggio, decanti (rubinetto e macchia) o aspiri. Ripeti 4 volte supplementari per complessivamente 5 lavaggi. Alla conclusione del lavaggio, inverta il piatto e spilli tutta la soluzione residua del lavaggio su carta assorbente.

• Aggiunga il µL 100 del substrato ad ogni pozzo. Copra ed incubi alla temperatura ambiente (18-25℃) nello scuro per la reazione per 10 minuti. Non scuota il piatto dopo l'aggiunta del sottostato.

• Aggiunga il µL 50 della soluzione di arresto ad ogni pozzo.

• Scuota affinchè 15-20 secondi mescolino il liquido all'interno dei pozzi. È importante assicurarsi che i cambiamenti blu di colore da ingiallire completamente.

• Legga la capacità di assorbimento di ogni pozzo a 450 nanometro (facendo uso di 620 a 630 nanometro come la lunghezza d'onda di riferimento per minimizzare le imperfezioni buone) in un micro lettore del piatto. I risultati dovrebbero essere letti in 30 minuti di aggiunta fermano la soluzione.