Pc del corredo 96 della prova dell'ormone luteinizzante della striscia test ISO13485 del LH di Elisa

LH Elisa Kit Luteinizing Hormone

1. Uso progettato

Dosagggio immunologico per la determinazione quantitativa in vitro dell'ormone luteinizzante in siero umano.

2. Riassunto

• Il LH (ormone luteinizzante), insieme a FSH (ormone follicolo stimolante), appartiene alla famiglia della gonadotropina. Il LH e FSH regolano e stimolare sinergico la crescita e la funzione delle gonadi (ovaie e testicoli). Come FSH, TSH e il hCG, LH è una glicoproteina che consiste di due unità secondarie (α- e β-catene). (1, 2, 3) questo proteohormone, che consiste di 121 dello zucchero tre e di aminoacidi catene, ha un peso molecolare di 29500 daltons. In donne, le gonadotropine agiscono all'interno del circuito di regolamento dell'ipotalamo-ipofisi-ovaia per controllare il ciclo mestruale.
• Il LH e FSH sono liberati negli impulsi dalle cellule gonadotrope dell'ipofisi anteriore e del passaggio via la circolazione sanguigna alle ovaie. Qui le gonadotropine stimolano la crescita e la maturazione del follicolo e quindi della biosintesi degli estrogeni e dei progesteroni. Le più alte LH-concentrazioni si presentano durante il picco della metà ciclo ed inducono l'ovulazione e la formazione del corpo luteo, il prodotto principale della secrezione di cui è progesterone. Nelle cellule di Leydig dei testicoli, il LH stimola la produzione di testosterone. La determinazione della concentrazione del LH è utilizzata nella delucidazione delle disfunzioni all'interno del sistema delle ipotalamo-ipofisi-gonadi. La determinazione del LH insieme con FSH è utilizzata per le seguenti indicazioni: malattie congenite con le aberrazioni cromosomiche (per esempio la sindrome di Turner), le ovaie policistiche (PCO), chiarenti le cause di amenorrea, sindrome della menopausa ed insufficienza sospettata delle cellule di Leydig. (1, 4, 5)

3. Principio della prova

Principio del panino. Durata totale dell'analisi: 80 minuti.

• Il campione, Anti-LH ha ricoperto i microwells ed il Anti-LH identificato enzima si combina.

• Durante l'incubazione, il LH presenta nel campione si concede reagire

simultaneamente con i due anticorpi, con conseguente molecole del LH che sono

interposto fra la fase solida e gli anticorpi enzima-collegati.

• Dopo il lavaggio, un complesso è generato fra la fase solida, il LH all'interno del campione e gli anticorpi enzima-collegati dalle reazioni immunologiche.

• La soluzione del substrato poi si aggiunge e catalizzata da questo complesso, con conseguente reazione cromogena. La reazione cromogena risultante è misurata come capacità di assorbimento.

• La capacità di assorbimento è proporzionale alla quantità di LH nel campione.

Reagenti

Materiali forniti

• Microplate ricoperto, 8 X12 strisce, 96 pozzi, ricoperti prima con il topo monoclonale

Anti-LH.

• Calibratori, 6 fiale, 1 ml ciascuno, pronte per l'uso; Concentrazioni: 0 (A), 5 (B), 20 (C), 50 (D), 100 (E) e 200 (F) mIU/mL.

• Coniugato degli enzimi, 1 fiala, 11 ml di topo identificato di HRP (perossidasi del rafano) Anti-LH monoclonale nell'amplificatore Tris-NaCl che contiene BSA (albumina di siero bovino). Contiene 0,1% preservativi ProClin300.

• Substrato, 1 fiala, 11ml, pronto per l'uso, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Fermi la soluzione, 1 fiala, 6,0 ml di 1 acido solforico di mol/l.

• Concentrato della soluzione del lavaggio, 1 fiala, 25 ml (40X si è concentrato), PBS-Tween

soluzione del lavaggio.

• IFU, 1 copia.

• Coperchio del piatto: 1 pezzo.

Materiali richiesti (ma non fornito)

• Lettore di Microplate con capacità assorbente di lunghezza d'onda 450nm e 620nm.

• Rondella di Microplate.

• Incubatrice

4. Metodo di prova

• Usi soltanto il numero dei pozzi richiesto e formatti i pozzi dei microplates per

ogni calibratore e campione da analizzare.

• Aggiunga il μL 25 dei calibratori o dei campioni ad ogni pozzo.

• Aggiunga il μL 100 del coniugato degli enzimi ad ogni pozzo.

• Scuota delicatamente il microplate affinchè 30 secondi si mescolino.

• Copra il piatto di coperchio del piatto ed incubi a °C 37 per 60 minuti.

• Scarti il contenuto di micro piatto dalla decantazione o dall'aspirazione. Se

decantando, spilli e macchi l'essiccatoio a piatti con carta assorbente.

• Aggiunga il μL 350 della soluzione del lavaggio, decanti (rubinetto e macchia) o aspiri. Ripeti 4 volte supplementari per complessivamente 5 lavaggi. Una rondella automatizzata della striscia del microplate può essere usata. Alla conclusione del lavaggio, inverta il piatto e spilli tutta la soluzione residua del lavaggio su carta assorbente.

• Aggiunga il μL 100 del substrato ad ogni pozzo.

• Incubi alla temperatura ambiente (18-25℃) nello scuro per la reazione per 20 minuti. Non scuota il piatto dopo l'aggiunta del sottostato.

• Aggiunga il μl 50 della soluzione di arresto ad ogni pozzo.

• Scuota affinchè 15-20 secondi mescolino il liquido all'interno dei pozzi. È importante a

assicuri che i cambiamenti blu di colore per ingiallire completamente.

• Legga la capacità di assorbimento di ogni pozzo a 450 nanometro (facendo uso di 620 a 630 nanometro come

lunghezza d'onda di riferimento per minimizzare le imperfezioni buone) in un micro lettore del piatto.