1. Calcolare il numero desiderato di micropozzetti. Rimuovere i micropozzetti rimanenti e riporli con essiccante nella
sacca di plastica richiudibile, sigillare e conservare a 2-8°C per uso futuro.
2. Aggiungere Calibratori e Campioni:
2. 1 Pozzetto di Blank: Non aggiungere reagenti.
2. 2 Pozzetti Calibratori: Aggiungere 100 µL di Calibratori nei pozzetti di controllo designati.
2.3 Pozzetti di Test: Aggiungere 100 µL di Diluente Campione nei pozzetti di test, quindi aggiungere 10 µL di campione nel pozzetto corrispondente.
2.4 Agitare delicatamente la piastra per 20 secondi, quindi coprire la piastra con il sigillante.
3. Incubare: Incubare la piastra a 37°C per 30 minuti.
4. Fase di Lavaggio (Può essere eseguita manualmente o con lavaggio automatizzato):
Lavaggio manuale: Rimuovere con cura la miscela di incubazione smaltendo la soluzione in un contenitore di rifiuti. Riempire ogni
pozzetto con 350 µL di tampone di lavaggio diluito e agitare delicatamente per 20-30 secondi. Smaltire completamente la soluzione di lavaggio. Ripetere altre 4
volte. Dopo aver completato l'ultimo passaggio di lavaggio, tamponare la piastra su carta assorbente per rimuovere il liquido residuo.
Lavaggio automatizzato: Il lavaproiettori automatico deve essere calibrato per garantire un lavaggio efficiente. Riempire ogni pozzetto con 350 µL di
tampone di lavaggio diluito e lasciare in ammollo per 20-30 secondi. Aspirare completamente tutti i pozzetti. Ripetere altre 4 volte.
5. Coniugato: Aggiungere 100 µL di coniugato in ogni pozzetto, eccetto il Pozzetto di Blank.
6. Incubare: Coprire i pozzetti e incubare a 37°C per 30 minuti.
7. Fase di Lavaggio: Lavare la piastra 5 volte come descritto al punto 4.
8. Substrato: Aggiungere 50 µL di Substrato A e 50 µL di Substrato B in ogni pozzetto, incluso il Pozzetto di Blank. Agitare delicatamente i
micropozzetti per 20 secondi. Incubare a 37°C al buio per 15 minuti.
9. Soluzione di Stop: Aggiungere 50 µL di Soluzione di Stop in ogni pozzetto. Dovrebbe svilupparsi un colore giallo nei pozzetti contenenti campioni positivi.
10. Leggere i Risultati: Leggere a 450/630-700 nm entro 30 minuti.
1. Nota: La micropiastra può anche essere letta a 450 nm, ma è fortemente raccomandato leggerla a 450/630-700 nm per
ottenere risultati migliori.
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