1.Calcolare il numero desiderato di micro-fori.Rimuovere i restanti micro-fori e inserirli con essiccante nel
sacchetto di plastica sigillabile, sigillato e conservato a 2-8°C per uso successivo.
2Aggiungere calibratori e campioni:
21 Pozzo vuoto: non aggiungere reagenti.
2. 2 pozzi di calibrazione: aggiungere 100 μL di calibrazione nei pozzi di controllo designati.
2.3 Pozzi di prova: aggiungere 100 UL di diluente per campioni ai pozzi di prova, quindi aggiungere 10 UL di campioni nel pozzo corrispondente.
2.4 Agitare delicatamente la piastra per 20 secondi e poi coprire la piastra con il sigillante.
3Incubazione: incubazione della piastra a 37°C per 30 minuti.
4. Passo di lavaggio (può essere eseguito manualmente o con lavaggio automatico):
Lavaggio manuale: rimuovere attentamente la miscela di incubazione gettando la soluzione in un contenitore di rifiuti.
scaricare completamente la soluzione di lavaggio; ripetere 4
Dopo aver completato l'ultima fase di lavaggio, toccare la piastra sulla carta assorbente per rimuovere il liquido residuo.
Lavaggio automatico: la lavastoviglie automatica deve essere calibrata per garantire un lavaggio efficiente.
aspirare completamente tutti i pozzi, ripetere altre 4 volte.
5Conjugato: aggiungere 100 μL di coniugato in ogni pozzo tranne il pozzo vuoto.
6Incubare: coprire i pozzi e incubare a 37°C per 30 minuti.
7Passo di lavaggio: lavare il piatto 5 volte come descritto nel passo 4.
8. Substrato: aggiungere 50 μL di Substrato A e 50 μL di Substrato B in ciascun pozzo, compreso il pozzo a vuoto.
incubare a 37°C al buio per 15 minuti.
9. Soluzione di arresto: aggiungere 50 μL di soluzione di arresto a ciascun pozzo.
10. Lettura dei risultati: lettura a 450/630-700 nm entro 30 minuti.
1. Nota: La microplate può anche essere letta a 450 nm, ma si raccomanda vivamente di leggerla a 450/630-700 nm per
risultati migliori.
Cronometria: lettura della densità ottica (OD) del campione a 450 nm con un lettore di micro piastre.
Il valore medio di OD del controllo negativo ≤ 0,1 e il valore medio di OD del controllo positivo ≥ 0.8, la prova è valida,
altrimenti il test è non valido.
Valore limite (CO) = Valore medio OD del controllo negativo x 3 (calcolato per 0,10 quando la media
il valore OD del controllo negativo è < 0.10, calcolato in base al valore effettivo quando il controllo negativo medio OD
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