Il virus della dengue è un flavivirus che si trova in gran parte nelle zone tropicali e subtropicali.
Il virus della dengue è trasmesso da zanzare,principalmente da Aedes aegypti e Aedes albopictus.
I virus della dengue trasmessi dalle zanzare (serotipo 1-4) causano la febbre dengue, una grave malattia simile all'influenza.
L'OMS stima che il tasso di mortalità sia aumentato nel terzo mondo e si diffonda nei paesi sviluppati subtropicali, compresi gli Stati Uniti.
che ogni anno si verificano in tutto il mondo 50-80 milioni di casi di febbre dengue, compresa una forma potenzialmente mortale della malattia chiamata
Infezione primaria da virus della dengue provoca un'autopsia.
malattia limitante caratterizzata da febbre da lieve a alta che dura da 3 a 7 giorni, mal di testa grave con dolore dietro gli occhi, muscolo
L'infezione secondaria è la forma più comune della malattia in molte parti del sud-est.
Questa forma di malattia è più grave e può provocare DHF e DSS.
Il tasso di mortalità può raggiungere il 40%, con febbre alta, eviti emorragici e insufficienza circolatoria.
La diagnosi di DSS è particolarmente importante in quanto i pazienti possono morire entro 12 a 24 ore se non viene fornito un trattamento adeguato.
- non è stato somministrato.
L' infezione primaria da virus della dengue è caratterizzata da elevazioni dei livelli di antigeni NS1 specifici da 0 a 9 giorni dopo l' insorgenza della malattia.
La diagnosi precoce di dengue riduce il rischio di complicazioni come DHF o DSS,
specialmente nei paesi in cui la dengue è endemica.
Procedura di prova
1Tutti i reagenti devono essere lasciati a temperatura ambiente per 15 minuti prima dell'uso.
2. Diluire il tampone di lavaggio con acqua distillata alla velocità di 1:40 prima dell'uso.
3. Aggiungere 100μL di diluente campione nel pozzo corrispondente, aggiungere 10μL di campione nel pozzo corrispondente (non aggiungere nel pozzo vuoto). Mescolare a fondo utilizzando la pipetta.Aggiungere 100 μl di controllo positivo e di controllo negativo al pozzo di controllo positivo e al pozzo di controllo negativoIl campione deve corrispondere al numero di micro piastre, ciascuna piastra deve essere dotata di due pozzi di controllo negativo, di un pozzo di controllo positivo e di un pozzo di controllo in bianco.
Nota: utilizzare una punta di pipetta separata per ogni campione, controllo negativo e positivo, per evitare la contaminazione incrociata.
4Agitare delicatamente per mescolare per 30 minuti. Incubare a 37°C per 30 minuti con la membrana della piastra di sigillamento che sigilla la piastra.
5. Alla fine dell'incubazione, rimuovere e scartare il coperchio della piastra. Rimuovere, aggiungere tampone di lavaggio a ciascun pozzo per 20 secondi. Ripetere 5 volte. Dopo il ciclo di lavaggio finale,girare il piatto su carta da tappatura o asciugamano pulito, e toccare per rimuovere eventuali residui.
6Aggiungere rispettivamente il coniugato 50 μL (non aggiungere nel pozzo vuoto).
7. Incubare a 37°C per 30 minuti con la membrana della piastra di tenuta che sigilla la piastra. Ripetere il lavaggio per 5 volte come nel passo 5.
8Aggiungere il substrato A (50μL) e il substrato B (50μL) (non aggiungere nel pozzo vuoto).
9Aggiungere 50μL di soluzione di arresto a ciascun pozzo (non aggiungere nel pozzo vuoto).Calibrare il lettore di piastre con il pozzo Blank e leggere l'assorbimento a 450nm. Se si utilizza uno strumento a doppio filtro, impostare la lunghezza d'onda di riferimento a 630 nm. Non è consentito impostare pozzi vuoti se si utilizza doppia lunghezza d'onda per rilevare. Calcolare il valore di taglio e valutare i risultati.
Immagazzinamento
• Conservare a 2-8°C.
• Mettere i pozzi non utilizzati nella busta in alluminio con zip e riportarli a 2-8 °C, in queste condizioni i pozzi rimarranno stabili per 2 mesi,o fino alla data di scadenza indicata, a seconda della prima.
• sigillare e rimettere i calibratori non utilizzati a 2-8 °C, condizioni in cui la stabilità sarà mantenuta per 1 mese, per un uso più lungo, conservare i calibratori aperti in aliquoti e congelare a 20 °C.Evitare più cicli di congelamento e scioglimento.
• Sigillare e rimettere tutti gli altri reagenti non utilizzati a 2-8 °C, in queste condizioni la stabilità sarà mantenuta per 2 mesi, o fino alla data di scadenza indicata, a seconda di quale sia la prima.
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