Anticorpi contro l' antigene nucleare del virus dell' epatite B (HBcAb)

ELISA TestK.- Sì.

Solo per uso diagnostico in vitro e professionale.

NOME DEL PRODOTTO

Kit di prova ELISA anti-HBc (siero/plasma)

Utilizzatori

Questo kit anti-HBc ELISA è un test di rilevazione qualitativa di anticorpi contro l' antigene nucleare del virus dell' epatite B (HBcAb) nel siero/plasma umano.Il reagente è adatto per lo screening clinico e la diagnosi dell'infezione da virus dell'epatite B nel siero/plasma umano.

Principio di prova

Il virus dell' epatite B (HBV) è una busta,virus del DNA a doppio filamento appartenente alla famiglia degli Hepadnaviridae e riconosciuto come la principale causa di epatite trasmessa dal sangue insieme al virus dell'epatite C (HCV)L'infezione da HBV induce uno spettro di manifestazioni cliniche che vanno da una malattia lieve e non apparente a un'epatite fulminante, gravi malattie epatiche croniche,che in alcuni casi possono portare a cirrosi e carcinoma del fegatoLa classificazione di un'infezione da epatite B richiede l'identificazione di diversi marcatori sierologici espressi durante le tre fasi (incubazione, acuta e convalescente) dell'infezione.

Il componente principale del virus è l' antigene nucleare dell' epatite B (HBcAg).Questo antigene nucleare è costituito da un singolo polipeptide di circa 17kD che viene scaricato al disaggregazione delle particelle nucleari- almeno un determinante immunologico è presente nell'antigene.

Poco dopo l' insorgenza di HBsAg, gli anticorpi contro HBcAg (anticorpo totale anti-HBc e IgM) appaiono e non scompaiono mai.l' infezione da epatite B può essere contratta senza anti-HBc immunologicamente rilevabiliIl test anti-HBc fornisce dati sulla prevalenza dell'epatite B in varie popolazioni.cronica, o infezione da HBV risolta. L'identificazione dell'anti-HBc è vitale quando viene diagnosticata in un contesto clinico.il marcatore anti-HBc consente una corretta diagnosi e un adeguato monitoraggio della progressione del virusGli anti-HBc possono essere l' unico indicatore di infezione da epatite B (compresi altri test su pazienti HBsAg negativi).

Il sistema del test HBcAb ELISA si basa sul principio competitivo di incubazione in una fase solida.è in competizione con gli anti-HBc monoclonali coniugati alla perossidasi del rafano (HRP-Conjugato) per una quantità fissa di HBcAg purificato pre-rivestito nella microplateSe non è presente anti-HBc, l'anti-HBc coniugato HRP si lega con gli antigeni all'interno dei pozzi.Dopo l'aggiunta di soluzioni di cromogeni A e B nei pozzi e durante l'incubazione, appare un prodotto di colore blu. Dopo aver interrotto la reazione con acido solforico, il colore blu diventa giallo. La presenza di anticorpi contro HBcAg nel campione è indicata da un colore basso,o nessun colore presente.

Requisiti per il campione

1.Raccolta di esemplari:Non è richiesta alcuna preparazione speciale da parte del paziente. Il campione deve essere prelevato secondo le normali prassi di laboratorio.Il sangue prelevato mediante punzione venosa deve essere lasciato coagulare in modo naturale e completo il siero deve essere separato dal coagulo il prima possibile per evitare l' emolisi dei globuli rossiOccorre fare attenzione affinché i campioni di siero/plasma siano trasparenti e non contaminati da microrganismi.

2.HNon deve essere effettuata alcuna analisi di campioni con gravi lipemiche, icteriche o emolitiche. utilizzatoin quanto possono dare risultati falsi nel test.Non inattivare il calore EsemplariQuesto può causare il deterioramento dell' analito bersaglio.

3L' HBcAb ELISA è destinato SOLO al test di singoli campioni di siero/plasma.

4- Trasporto e conservazione: conservare i campioni a 2-8°C. I campioni non necessari per il test entro 3 giorni devono essere conservati congelati (-20°C o meno).Per spedizione, i campioni devono essere confezionati ed etichettati in conformità alle normative locali e internazionali vigenti per il trasporto di campioni clinici e agenti etologici.

Procedura di prova

1Tutti i reagenti devono essere lasciati a temperatura ambiente per 15 minuti prima dell'uso.

2. Diluire il tampone di lavaggio con acqua distillata alla velocità di 1:40 prima dell'uso.

3Il campione deve corrispondere al numero di microplate, ciascuna piastra deve essere dotata di 3 pozzi di controllo negativo, 2 pozzi di controllo positivo e 1 pozzo di controllo in bianco.(Se rilevato con rilevamento a doppia lunghezza d'onda, non è consentito impostare un pozzo di controllo vuoto).

Nota: utilizzare una punta di pipetta di smaltimento separata per ogni campione, controllo negativo e positivo, per evitare la contaminazione incrociata.

4Aggiungere un campione di 50 μL nel pozzo corrispondente (Quando questo kit è utilizzato per la diagnosi clinica ausiliaria, il campione da testare deve essere diluito con soluzione salina normale a 1:30 per la prova.Quando viene utilizzato per indagini epidemiologiche, il campione originale può essere rilevato ), aggiungere 50 μL di controllo negativo e di controllo positivo ai pozzi di controllo negativo e ai pozzi di controllo positivo.Aggiungere rispettivamente 50μL di enzima coniugata (non aggiungere nel pozzo vuoto).

5Agitare per 30 secondi con un oscillatore (questa fase è molto importante) Incubare a 37 °C per 30 minuti con la membrana della piastra di tenuta che sigilla la piastra.

6. Alla fine dell'incubazione, rimuovere e scartare il coperchio della piastra. Rimuovere, aggiungere tampone di lavaggio a ciascun pozzo per 20 secondi. Ripetere 5 volte. Dopo il ciclo di lavaggio finale,girare il piatto su carta da tappatura o asciugamano pulito, e toccare per rimuovere eventuali residui.

7. Aggiungere il substrato A (50μL) e il substrato B (50μL) (non aggiungere nel pozzo vuoto). Mescolare delicatamente agitando. Incubare a 37 °C per 15 minuti con la membrana della piastra di sigillamento che sigilla la piastra.

8Aggiungere 50μL di soluzione di arresto a ciascun pozzo (non aggiungere nel pozzo vuoto).Calibrare il lettore di piastre con il pozzo Blank e leggere l'assorbimento a 450nm.Se si utilizza uno strumento a doppio filtro, impostare la lunghezza d'onda di riferimento a 630 nm. Non è consentito impostare pozzi vuoti se si utilizza doppia lunghezza d'onda per rilevare. Calcolare il valore di taglio e valutare i risultati.