Prova di stimolazione dell'ormone della tiroide del TEST ELISA della tirotropina TSH

CORREDO del TEST ELISA caldo di vendita TSH
Riferimento: Prove DS177701 96

Uso progettato
Dosagggio immunologico per la determinazione quantitativa in vitro di tirotropina in siero umano.

1. Riassunto

• L'ormone stimolante la tiroide (TSH, tirotropina) è una glicoproteina che ha un peso molecolare di approssimativamente 30000 daltons e che consiste di due unità secondarie.
• La misura nel siero di concentrazione della tirotropina sovente (TSH), di una glicoproteina con un peso molecolare di 28.000 daltons e secernuto dall'ipofisi anteriore, è considerare generalmente come l'indicatore più sensibile disponibile per la diagnosi di ipotiroidismo (ipofisario) primario e secondario (1,2).
• Le misure di TSH sono ugualmente utili nella differenziazione dell'ipotiroidismo (ipotalamico) secondario e terziario dalla tiroide primaria. Il rilascio di TSH dall'ipofisi è regolato dal fattore di liberazione della tirotropina (TRH), che è secernuto dall'ipotalamo e tramite azione diretta di T4 e di triiodotironina (T3), gli ormoni tiroidei, all'ipofisi.
• I livelli di aumento di T3 e di T4 riduce la risposta dell'ipofisi agli effetti stimolatori di TRH. Nell'ipotiroidismo secondario e terziario, le concentrazioni di T4 sono solitamente basse ed i livelli di TSH sono generalmente bassi o normali. La carenza ipofisaria di TSH (ipotiroidismo secondario) o l'insufficienza di stimolazione dell'ipofisi da TRH (ipotiroidismo terziario) causa questa.
• La prova di stimolazione di TRH differenzia queste circostanze. Nell'ipotiroidismo secondario, la risposta di TSH a TRH è smussata mentre una risposta normale o in ritardo è ottenuta in ipotiroidismo terziario. Ulteriormente, l'arrivo delle analisi immunoenzymometric ha fornito al laboratorio la sensibilità sufficiente per permettere alla differenziazione dell'ipertiroidismo da popolazione euthyroid e ad estendere l'utilità delle misure di TSH. Questo metodo è un'analisi di seconda generazione, che forniscono i mezzi per distinzione nella gamma hyperthyroid-euthyroid. (3)

2. I materiali dei reagenti hanno fornito
• Microplate ricoperto, 8 X12 strisce, 96 pozzi, ricoperti prima con anti--TSH monoclonale del topo.
• Calibratori, 6 fiale, 1 ml ciascuno, pronte per l'uso; Concentrazioni: 0 (A), 0,5 (B), 2 (C), 5 (D), 10 (E) e 25 (F) μIU/mL.
• Coniugato degli enzimi, 1 fiala, 6,0 ml di topo identificato di HRP (perossidasi del rafano) anti--TSH monoclonale nell'amplificatore Tris-NaCl che contiene BSA (albumina di siero bovino). Contiene 0,1% preservativi ProClin300.
• Substrato, 1 fiala, 11ml, pronto per l'uso, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Fermi la soluzione, 1 fiala, 6,0 ml di 1 acido solforico di mol/l.
• Concentrato della soluzione del lavaggio, 1 fiala, 25 ml (40X si è concentrato), soluzione del lavaggio della PBS-Tween.
• IFU, 1 copia.
• Coperchio del piatto: 1 pezzo.

Materiali richiesti (ma non fornito)
• Lettore di Microplate con capacità assorbente di lunghezza d'onda 450nm e 620nm.
• Rondella di Microplate.
• Incubatrice.
• Agitatore del piatto.
• Micropipette e micropipette multicanali che consegnano 50μl con una precisione di migliore di 1,5%.
• Carta assorbente.
• Acqua distillata

3. Metodo di prova

Assicuri che i campioni, i calibratori ed i comandi dei pazienti siano alla temperatura ambiente (℃ 18-25) prima della misura. Mescoli tutti i reagenti con delicatamente l'inversione prima dell'uso.

• Usi soltanto il numero dei pozzi richiesto e formatti i pozzi dei microplates affinchè ogni calibratore e campione siano analizzati. • Aggiunga il µL 25 dei calibratori o dei campioni ad ogni pozzo.

• Aggiunga il µL 100 del coniugato degli enzimi ad ogni pozzo.

• Scuota delicatamente il microplate affinchè 30 secondi si mescolino.

• Copra il piatto di coperchio del piatto ed incubi a 37℃ per 60 minuti.

• Scarti il contenuto di micro piatto dalla decantazione o dall'aspirazione. Se decantando, spilli e macchi l'essiccatoio a piatti con carta assorbente.

• Aggiunga il µL 350 della soluzione del lavaggio, decanti (rubinetto e macchia) o aspiri. Ripeti 4 volte supplementari per complessivamente 5 lavaggi. Una rondella automatizzata della striscia del microplate può essere usata. Alla conclusione del lavaggio, inverta il piatto e spilli tutta la soluzione residua del lavaggio su carta assorbente.

• Aggiunga il µL 100 del substrato ad ogni pozzo.

• Copra ed incubi alla temperatura ambiente (18-25℃) nello scuro per la reazione per 20 minuti. Non scuota il piatto dopo l'aggiunta del sottostato.

• Aggiunga il µL 50 della soluzione di arresto ad ogni pozzo.

• Scuota affinchè 15-20 secondi mescolino il liquido all'interno dei pozzi. È importante assicurarsi che i cambiamenti blu di colore da ingiallire completamente.

• Legga la capacità di assorbimento di ogni pozzo a 450 nanometro (facendo uso di 620 a 630 nanometro come la lunghezza d'onda di riferimento per minimizzare le imperfezioni buone) in un micro lettore del piatto. I risultati dovrebbero essere letti in 30 minuti di aggiunta fermano la soluzione