Kit di analisi TLR4 RUO ELISA per uso medico RUO solo per uso di ricerca

Scopo:

Questo kit consente la determinazione delle concentrazioni di TLR4 nel siero umano.

Principio dell'analisi

Il kit analizza il livello di TLR4 umano nel campione, usa l'anticorpo TLR4 umano purificato per rivestire i pozzi della piastra microtiter, produce un anticorpo in fase solida, quindi aggiunge TLR4 ai pozzi,Anticorpo TLR4 combinato con etichetta HRP, diventa complesso anticorpo-antigene-enzima-anticorpo, dopo lavaggio Completamente, aggiungere TMB soluzione di substrato, TMB substrato diventa di colore blu At HRP enzima-catalizzato,la reazione viene terminata con l'aggiunta di una soluzione di acido solforico e il cambiamento di colore viene misurato spettrophotometricamente ad una lunghezza d'onda di 450 nmLa concentrazione di TLR4 umano nei campioni è quindi determinata confrontando l'O.D. dei campioni con la curva standard.

Parametri tecnici:

Materiali forniti con il kit:

Requisiti per il campione

• L'estrazione deve essere effettuata il più presto possibile dopo la raccolta degli esemplari, secondo la letteratura pertinente, e deve essere effettuata l'esperimento il più presto possibile dopo l'estrazione.il campione può essere conservato a -20 °C per preservare, Evitare ripetuti cicli di congelamento e scioglimento.
• Non è possibile rilevare il campione che contiene NaN3, perché NaN3 inibisce l'HRP attivo.

Procedura di valutazione

• Diluire e aggiungere il campione:Diluire Densità originale Standard come nella seguente tabella:

2. aggiungere campione:impostare separatamente i pozzi vuoti (i pozzi di confronto vuoti non aggiungono campione e reagente HRP-Conjugate, altrimenti ogni fase è la stessa).Aggiungere 50 μl di standard a Microelisa stripplate, aggiungere 40 μl di diluzione del campione al pozzo del campione di prova, quindi aggiungere il campione di prova 10 μl (il diluimento finale del campione è di 5 volte), aggiungere il campione ai pozzi, non toccare la parete del pozzo per quanto possibile e mescolare delicatamente.

3Incubazione: dopo aver chiuso la piastra con la membrana della piastra di chiusura, incubazione per 30 minuti a 37°C.

4. Configurare liquido: soluzione di lavaggio 30 volte (o 20 volte) diluita 30 volte (o 20 volte) con acqua distillata e riserva.

5. Lavaggio: rivelare la membrana della piastra di chiusura, scartare il liquido, asciugarlo con un dondolo, aggiungere tampone di lavaggio a ogni pozzo, fermo per 30 secondi quindi scaricare, ripetere 5 volte, asciugarlo con un battito.

6.Aggiungere enzima: aggiungere 50 μl di reagente HRP-Conjugato a ciascun pozzo, tranne il pozzo vuoto.

7Incubazione: operazione con 3.

8Lavaggio: operazione con 5.

9.Colore: aggiungere a ciascun pozzo la soluzione di cromogeno A 50ul e la soluzione di cromogeno B 50ul, evitare la conservazione della luce per 10 minuti a 37°C

10.Arresto della reazione: aggiungere 50 μl di soluzione di arresto a ciascun pozzo, Arresto della reazione ((il colore blu cambia di colore giallo).

11.Analisi: prendere un pozzo vuoto a zero, leggere l'assorbimento a 450 nm dopo l'aggiunta della soluzione di arresto e entro 15 minuti.

Calcolare

Prendi la densità standard come orizzontale, il valore OD per la verticale, disegna la curva standard su carta grafica,Trovare la densità corrispondente secondo il valore di campione OD dalla curva campione, moltiplicato per il multiplo di diluizione, oppure calcolare l'equazione di regressione lineare della curva standard con la densità standard e il valore OD, con il valore OD del campione nell'equazione,calcolare la densità del campione, moltiplicato per il fattore di diluizione, il risultato è la densità effettiva del campione.