Kit Elisa per il fattore di necrosi tumorale di topo alfa

Fattore di necrosi tumorale α del ratto, Cachectina, TNF, TNFSF2, Kit ELISA TNF-α

Kit Elisa per il fattore di necrosi tumorale alfa del ratto per Tnf alfa 48 pozzetti

Materiali forniti con il kit

Principio

Questo kit ELISA utilizza Sandwich-ELISA come metodo. La Microelisa stripplate fornita in questo kit è stata pre-rivestita con un anticorpo specifico per TNF-α . Gli standard o i campioni vengono aggiunti ai pozzetti Microelisa stripplate appropriati e combinati con l'anticorpo specifico. Quindi viene aggiunto un anticorpo coniugato con perossidasi di rafano (HRP) specifico per TNF-α a ciascun pozzetto Microelisa stripplate e incubato. I componenti liberi vengono lavati via. La soluzione substrato TMB viene aggiunta a ciascun pozzetto. Solo quei pozzetti che contengono TNF-α e l'anticorpo trombomodulina coniugato con HRP appariranno di colore blu e poi diventeranno gialli dopo l'aggiunta della soluzione di arresto. La densità ottica (DO) viene misurata spettrofotometricamente a una lunghezza d'onda di 450 nm. Il valore DO è proporzionale alla concentrazione di TNF-α. È possibile calcolare la concentrazione di TNF-α nei campioni confrontando la DO dei campioni con la curva standard.

Note:

• Conservare il kit a 4°C al ricevimento. Il kit deve essere equilibrato a temperatura ambiente prima del dosaggio. Rimuovere le strisce non necessarie dalla piastra rivestita con anticorpi anti-TNF-α, richiuderle in un foglio con chiusura a zip e conservare a 4°C.
• I precipitati possono apparire nel tampone di lavaggio concentrato. Si prega di riscaldare il tampone per sciogliere tutti i precipitati, il che non influirà sui risultati.
• È necessario utilizzare una pipetta accurata per evitare errori sperimentali. I campioni devono essere aggiunti alla microplacca in meno di 5 minuti. Se sono inclusi un gran numero di campioni, si consiglia una pipetta multicanale.
• La curva standard deve essere inclusa in ogni dosaggio. Si consigliano pozzetti replicati. Se il valore OD del campione è maggiore del primo pozzetto degli standard, diluire il campione (n volte) prima del test. Quando si calcola la concentrazione originale di trombomodulina, moltiplicare per il fattore di diluizione totale (XnX5).
• Per evitare la contaminazione incrociata, i sigillatori per microplacche sono solo per un singolo utilizzo.
• Si prega di tenere il substrato lontano dalla luce.
• Tutte le operazioni devono essere eseguite rigorosamente in conformità con le istruzioni del produttore. I risultati sono determinati dal lettore di microplacche.
• Tutti i campioni, il tampone di lavaggio e i rifiuti devono essere trattati come agenti infettivi.
• I reagenti di lotti diversi non devono essere miscelati.

Le concentrazioni note dello standard TNF-a e la sua corrispondente DO di lettura sono tracciate sulla scala logaritmica (asse x) e sulla scala logaritmica (asse y) rispettivamente. La concentrazione di TNF-a nel campione è determinata tracciando la DO del campione sull'asse Y. La concentrazione originale viene calcolata moltiplicando per il fattore di diluizione.