VCAM-1 RUO Elisa Kit Molecola di adesione delle cellule endoteliche vascolari umane 1

Descrizione del prodotto:

Scopo

Questo kit consente di determinare le concentrazioni di VCAM-1 nel siero umano, nei supernati di coltura cellulare e in altri fluidi biologici

Principio dell'analisi

Il kit analizza il livello di VCAM-1 umano nel campione, usa l'anticorpo VCAM-1 umano purificato per rivestire i pozzi delle piastre microtiter, produce anticorpi in fase solida, quindi aggiunge VCAM-1 ai pozzi,Anticorpo combinato VCAM-1 con etichetta HRP, diventa complesso anticorpo-antigene-enzima-anticorpo, dopo lavaggio Completamente, aggiungere TMB soluzione di substrato, TMB substrato diventa di colore blu At HRP enzima-catalizzato,la reazione viene terminata con l'aggiunta di una soluzione di acido solforico e il cambiamento di colore viene misurato spettrophotometricamente ad una lunghezza d'onda di 450 nmLa concentrazione di VCAM-1 umano nei campioni è quindi determinata confrontando l'O.D. dei campioni con la curva standard.

Materiali forniti con il kit

Parametri tecnici:

Requisiti per il campione

• L'estrazione deve essere effettuata il più presto possibile dopo la raccolta degli esemplari, secondo la letteratura pertinente, e deve essere effettuata l'esperimento il più presto possibile dopo l'estrazione.il campione può essere conservato a -20 °C per preservare, Evitare ripetuti cicli di congelamento e scioglimento.
• Non è possibile rilevare il campione che contiene NaN3, perché NaN3 inibisce l'HRP attivo.

Procedura di valutazione

• Diluire e aggiungere il campione:Diluire Densità originale Standard come nella seguente tabella:

2. Aggiungere campione: fissare separatamente i pozzi vuoti (i pozzi di confronto vuoti non aggiungono campione e reagente HRP-Conjugate, altrimenti ogni fase è la stessa).Aggiungere 50 μl di standard a Microelisa stripplate, aggiungere 40 μl di diluzione del campione al pozzo del campione di prova, quindi aggiungere il campione di prova 10 μl (il diluimento finale del campione è di 5 volte), aggiungere il campione ai pozzi, non toccare la parete del pozzo per quanto possibile e mescolare delicatamente.

3Incubazione: dopo aver chiuso la piastra con la membrana della piastra di chiusura, incubazione per 30 minuti a 37°C.

4. Configurare liquido: soluzione di lavaggio 30 volte (o 20 volte) diluita 30 volte (o 20 volte) con acqua distillata e riserva.

5. Lavaggio: rivelare la membrana della piastra di chiusura, scartare il liquido, asciugarlo con un dondolo, aggiungere tampone di lavaggio a ogni pozzo, fermo per 30 secondi quindi scaricare, ripetere 5 volte, asciugarlo con un battito.

6Aggiungere enzima: aggiungere 50 μl di reagente HRP-Conjugato a ciascun pozzo, tranne il pozzo vuoto.

7Incubazione: operazione con 3.

8Lavaggio: operazione con 5.

9. Colore: aggiungere a ciascun pozzo la soluzione di cromogeno A 50ul e la soluzione di cromogeno B 50ul, evitare la conservazione della luce per 10 minuti a 37°C

10. Fermare la reazione: aggiungere Stop Solution50μl a ciascun pozzo, fermare la reazione ((il colore blu cambia di colore giallo).

11. Assay: prendere il pozzo vuoto come zero, leggere l' assorbente a 450 nm dopo l' aggiunta della soluzione di arresto e entro 15 min

Calcolare:

Prendi la densità standard come orizzontale, il valore OD per la verticale, disegna la curva standard su carta grafica,Trovare la densità corrispondente secondo il valore di campione OD dalla curva campione, moltiplicato per il multiplo di diluizione, oppure calcolare l'equazione di regressione lineare della curva standard con la densità standard e il valore OD, con il valore OD del campione nell'equazione,calcolare la densità del campione, moltiplicato per il fattore di diluizione, il risultato è la densità effettiva del campione.