Scopo:
Questo kit consente di determinare le concentrazioni di eme libero nel sangue intero.
Principio dell'analisi
Il kit analizza il livello di eme libero umano nel campione, usa l'anticorpo dell'eme libero umano purificato per rivestire i pozzi delle piastre microtiter, produce anticorpi in fase solida, poi aggiunge l'eme libero ai pozzi,Anticorpo libero combinato all' eme con etichetta HRP, diventa complesso anticorpo-antigene-enzima-anticorpo, dopo lavaggio Completamente, aggiungere TMB soluzione di substrato, TMB substrato diventa di colore blu At HRP enzima-catalizzato,la reazione viene terminata con l'aggiunta di una soluzione di acido solforico e il cambiamento di colore viene misurato spettrophotometricamente ad una lunghezza d'onda di 450 nmLa concentrazione di heme libero umano nei campioni è quindi determinata confrontando l'O.D. dei campioni con la curva standard.
Parametri tecnici:
| Nome del prodotto: |
Kit di prova ELISA RUO Heme libero umano |
| Paese di origine: |
Cina |
| Tipo di campione: |
Siero, plasma |
| Esemplare: |
Siero 50 μl |
| Temperatura di conservazione: |
2-8°C |
| Durata di conservazione: |
6 mesi |
| Sensibilità: |
Altezza |
| Tempo di prova: |
1 ora |
| Dimensione del kit: |
96 prove |
| Applicazioni: |
Diagnosi medica |
Materiali forniti con il kit:
| 1 |
soluzione di lavaggio |
20 ml × 1 bottiglia |
7 |
Smettere la soluzione |
6 ml × 1 bottiglia |
| 2 |
Reagente HRP-conjugato |
6 ml × 1 bottiglia |
8 |
Standard ((4 μg/ml) |
0.5 ml×1 bottiglia |
| 3 |
Microelisa stripplate |
12 ben × 8 strisce |
9 |
Diluente standard |
1.5 ml × 1 bottiglia |
| 4 |
Diluente per campione |
6 ml × 1 bottiglia |
10 |
Istruzione |
1 |
| 5 |
Soluzione di cromogeno A |
6 ml × 1 bottiglia |
11 |
Membrana della piastra di chiusura |
2 |
| 6 |
Soluzione di cromogeno B |
6 ml × 1 bottiglia |
12 |
Sacchetti sigillati |
1 |
Requisiti per il campione
- L'estrazione deve essere effettuata il più presto possibile dopo la raccolta degli esemplari, secondo la letteratura pertinente, e deve essere effettuata l'esperimento il più presto possibile dopo l'estrazione.il campione può essere conservato a -20 °C per preservare, Evitare ripetuti cicli di congelamento e scioglimento.
- Non è possibile rilevare il campione che contiene NaN3, perché NaN3 inibisce l'HRP attivo.
Procedura di valutazione
- Diluire e aggiungere il campione:Diluire Densità originale Standard come nella seguente tabella:
| 2 μg/ml |
5 Norma |
150 μl densità originale Standard+150 μl diluente standard |
| 1 μg/ml |
4 Norma |
150 μl 5 Standard + 150 μl diluente standard |
| 0.5 μg/ml |
3 Norma |
150 μl 4 Standard + 150 μl diluente standard |
| 00,25 μg/ml |
2 Norma |
150 μl 3 Standard + 150 μl diluente standard |
| 0.125 μg/ml |
1 Norma |
150 μl 2 Standard + 150 μl diluente standard |
2.aggiungere campione:Metti separatamente i pozzi vuoti (i pozzi di confronto vuoti non aggiungono campione e reagente HRP-Conjugate, altrimenti ogni fase è la stessa).Aggiungere 50 μl di standard a Microelisa stripplateAggiungere 40 μl di diluzione del campione al pozzo del campione di prova, quindi aggiungere 10 μl di campione di prova (la diluzione finale del campione è di 5 volte), aggiungere il campione ai pozzi, non toccare la parete del pozzo per quanto possibile e mescolare delicatamente.
3.Incubare: dopo aver chiuso la piastra con la membrana della piastra di chiusura, incubare per 30 minuti a 37°C.
4.Configurare liquido: soluzione di lavaggio 30 volte (o 20 volte) diluita 30 volte (o 20 volte) con acqua distillata e riserva.
5.lavaggio:scoprire la membrana della piastra di chiusura, scartare il liquido, asciugarlo con un colpo, aggiungere del tampone di lavaggio a ogni pozzo, fermarlo per 30 secondi e poi scaricare, ripetere 5 volte, asciugarlo con un battito.
6.aggiungere enzima:aggiungere 50 μl di reagente HRP-conjugato a ciascun pozzo, tranne che a pozzo vuoto.
7.incubare: operazione con 3.
8.lavaggio:operazione con 5.
9.colore:aggiungere a ciascun pozzo la soluzione di cromogeno A 50ul e la soluzione di cromogeno B 50ul, evitare la conservazione della luce per 10 minuti a 37°C
10.Arresto della reazione: aggiungere 50 μl di soluzione di arresto a ciascun pozzo, Arresto della reazione ((il colore blu cambia di colore giallo).
11.assay: prendere un pozzo vuoto a zero, leggere l'assorbimento a 450 nm dopo l'aggiunta della soluzione di arresto e entro 15 minuti.
Calcolare
Prendi la densità standard come orizzontale, il valore OD per la verticale, disegna la curva standard su carta grafica,Trovare la densità corrispondente secondo il valore di campione OD dalla curva campione, moltiplicato per il multiplo di diluizione, oppure calcolare l'equazione di regressione lineare della curva standard con la densità standard e il valore OD, con il valore OD del campione nell'equazione,calcolare la densità del campione, moltiplicato per il fattore di diluizione, il risultato è la densità effettiva del campione.
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