Principio dell'analisi
Questo kit consente di determinare le concentrazioni di P53 nel siero del ratto, nei supernati di coltura cellulare e in altri fluidi biologici
Il kit analizza il livello di CD16 umano nel campione, usa l'anticorpo umano purificato CD16 per rivestire i pozzi delle placche microtiter, produce anticorpi in fase solida, poi aggiunge CD16 ai pozzi,Anticorpo combinato CD16 con etichetta HRP, diventa complesso anticorpo-antigene-enzima-anticorpo, dopo il lavaggio Completamente, aggiungere TMB soluzione di substrato, TMB substrato diventa di colore blu At HRP enzima-catalizzato,la reazione viene terminata con l'aggiunta di una soluzione di acido solforico e il cambiamento di colore viene misurato spettrophotometricamente ad una lunghezza d'onda di 450 nmLa concentrazione di CD16 umano nei campioni è quindi determinata confrontando l'O.D. dei campioni con la curva standard.
Materiali forniti con il k- Sì.
| 1 |
soluzione di lavaggio |
20 ml × 1 bottiglia |
7 |
Smettere la soluzione |
6 ml × 1 bottiglia |
| 2 |
Reagente HRP-conjugato |
6 ml × 1 bottiglia |
8 |
Standard ((20 μg/l) |
0.5 ml×1 bottiglia |
| 3 |
Microelisa stripplate |
12 ben × 8 strisce |
9 |
Diluente standard |
1.5 ml × 1 bottiglia |
| 4 |
Diluente per campione |
6 ml × 1 bottiglia |
10 |
Istruzione |
1 |
| 5 |
Soluzione di cromogeno A |
6 ml × 1 bottiglia |
11 |
Membrana della piastra di chiusura |
2 |
| 6 |
Soluzione di cromogeno B |
6 ml × 1 bottiglia |
12 |
Sacchetti sigillati |
1 |
Requisiti per il campione
- L'estrazione deve essere effettuata il prima possibile dopo la raccolta degli esemplari e secondo la letteratura pertinente, e deve essere effettuata l'esperimento il prima possibile dopo l'estrazione.il campione può essere conservato a -20 °C per preservare, Evitare ripetuti cicli di congelamento e scioglimento.
- Non è possibile rilevare il campione contenente NaN3, perché NaN3 inibisce l'HRP attivo.
Procedura di valutazione
- Diluire e aggiungere il campione:Diluire Densità originale Standard come nella seguente tabella:
| 10 μg/l |
5 Norma |
150 μl densità originale Standard+150 μl diluente standard |
| 5 μg/l |
4 Norma |
150 μl 5 Standard + 150 μl diluente standard |
| 2.5 μg/l |
3 Norma |
150 μl 4 Standard + 150 μl diluente standard |
| 10,25 μg/l |
2 Norma |
150 μl 3 Standard + 150 μl diluente standard |
| 00,625 μg/l |
1 Norma |
150 μl 2 Standard + 150 μl diluente standard |
2.aggiungere campione:Metti separatamente i pozzi vuoti (i pozzi di confronto vuoti non aggiungono campione e reagente HRP-Conjugate, altrimenti ogni fase è la stessa).Aggiungere 50 μl di standard a Microelisa stripplate, aggiungere 40 μl di diluzione del campione al pozzo del campione di prova, quindi aggiungere il campione di prova 10 μl (il diluimento finale del campione è di 5 volte), aggiungere il campione ai pozzi, non toccare la parete del pozzo per quanto possibile e mescolare delicatamente.
3.Incubare: dopo aver chiuso la piastra con la membrana della piastra di chiusura, incubare per 30 minuti a 37°C.
4.Configurare liquido: soluzione di lavaggio 30 volte (o 20 volte) diluita 30 volte (o 20 volte) con acqua distillata e riserva.
5.lavaggio:scoprire la membrana della piastra di chiusura, scartare il liquido, asciugarlo con un colpo, aggiungere del tampone di lavaggio a ogni pozzo, fermarlo per 30 secondi e poi scaricare, ripetere 5 volte, asciugarlo con un battito.
6.aggiungere enzima:aggiungere 50 μl di reagente HRP-conjugato a ciascun pozzo, tranne che a pozzo vuoto.
7.incubare: operazione con 3.
8.lavaggio:operazione con 5.
9.colore:aggiungere a ciascun pozzo la soluzione di cromogeno A 50ul e la soluzione di cromogeno B 50ul, evitare la conservazione della luce per 15 minuti a 37°C
10.Arresto della reazione: aggiungere 50 μl di soluzione di arresto a ciascun pozzo, Arresto della reazione ((cambiamento del colore blu in giallo).
11.assay: prendere un pozzo vuoto a zero, leggere l'assorbimento a 450 nm dopo l'aggiunta della soluzione di arresto e entro 15 minuti.
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