Kit di prova TNF-α Elisa umano

Utilizzatori

Questo kit è utilizzato per la determinazione delle concentrazioni di TNF-α in supernati di coltura di cellule umane.

Procedura di valutazione

1- Diluire e aggiungere il campione:Diluire densità originale 400ng/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent 200ng/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent 100ng/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent 50ng/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent 25ng/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent

2.aggiungere campione:Mettiamo separatamente i pozzi bianchi (i pozzi bianchi di confronto non aggiungono campione e reagente HRP-Conjugate, altrimenti ogni fase è la stessa).Aggiungere 50 μl di standard a Microelisa stripplateAggiungere 40 μl di diluzione del campione al campione di prova, quindi aggiungere 10 μl di campione di prova (la diluzione finale del campione è di 5 volte), aggiungere il campione al campione di prova, non toccare il muro del campione per quanto possibile e mescolare delicatamente.

3.Incubare: dopo aver chiuso la piastra con la membrana della piastra di chiusura, incubare per 30 minuti a 37°C.

4.Configurare il liquido: 30 (o 20) volte la soluzione di lavaggio diluita 30 (o 20) volte con acqua distillata e riserva.

5.lavaggio: rivelare la membrana della piastra di chiusura, scartare il liquido, asciugarlo con un colpo, aggiungere del tampone di lavaggio a ogni pozzo, fermarlo per 30 secondi, quindi drenare, ripetere 5 volte, asciugarlo con un tocco.

6.aggiungere enzima:aggiungere 50 μl di reagente HRP-Conjugato a ciascun recipiente, ad eccezione del recipiente vuoto.

7.incubare: operazione con 3.

8.lavaggio:operazione con 5.

9.colore:aggiungere a ciascuna piastra la soluzione di cromogeno A 50ul e la soluzione di cromogeno B 50ul, evitare la conservazione alla luce per 10 minuti a 37°C

10.Arresto della reazione: aggiungere 50 μl di soluzione di arresto ad ogni bolla, Arresto della reazione ((il colore blu cambia a giallo).

11.assay: prendere il vuoto come zero, leggere l'assorbimento a 450 nm dopo l'aggiunta della soluzione di arresto e entro 15 min.

Requisiti per il campione

1. estrarre il più presto possibile dopo la raccolta del campione e secondo la letteratura pertinente, e dovrebbe essere sperimentato il più presto possibile dopo l'estrazione.1 campione può essere conservato a 20 °C per conservare, Evitare ripetuti cicli di congelamento e scioglimento.

2Non è possibile rilevare il campione che contiene NaN3, perché NaN3 inibisce l'HRP attivo.

Nota importante

1. il kit deve essere tolto dall' ambiente frigorifero, deve essere equilibrato per 15-30 minuti a temperatura ambiente, le piastre ELISA devono essere rivestite se non si sono consumate dopo l' apertura,la piastra deve essere conservata in sacchetto sigillato.

2. lavaggio tampone wil cristallizzazione separazione, può essere riscaldato l'acqua aiuta a dissolversi quando diluito. lavaggio non influisce sul risultato.

3. aggiungere campione con campionatore Ogni passo, e correggere la sua precisione frequentemente, evita l'errore sperimentale. aggiungere campione entro 5 min, se il numero di campioni è molto, raccomando di utilizzare Voley.

4. se il tenore di materiale di prova è eccessivamente elevato (l'OD del campione è maggiore del primo valore standard), si prega di diluire il campione (n volte), si prega di diluire e moltiplicare per il fattore di diluizione.(×n×5).

5La membrana della piastra di chiusura limita solo l'uso monouso, per evitare la contaminazione incrociata.

6Il substrato sfugge alla conservazione della luce.

7. Si prega di seguire rigorosamente le istruzioni di utilizzo, la determinazione dei risultati di prova deve prendere il lettore di microtiter come standard.

8. Tutti i campioni, il tampone di lavaggio e ogni tipo di rifiuto devono essere effettuati in base al processo del materiale infettivo.

9Non mescolare i reagenti con quelli di altri lotti.