Unità secondaria Alpha Mouse IL2R CD25 IL2-RA ELISA Kit di recettore dell'interleuchina-2

Alfa dell'unità secondaria di recettore dell'interleuchina-2 del topo; IL2R; CD25; Corredo di ELISA di IL2-RA

Materiali forniti del corredo

Requisiti dell'esemplare

• la coagulazione del siero alla temperatura ambiente 10-20 minuti, minuto di centrifugazione 20 alla velocità del giri/min. 2000-3000 rimuove il surnatante, se la precipitazione comparisse, centrifuga ancora.
• l'plasma-uso ha stato adatti agli ED o citrata il plasma come anticoagulante, miscela 10-20 minuti, centrifugazione 20 che il minuto alla velocità del giri/min. 2000-3000 rimuove il surnatante, se la precipitazione comparisse, centrifuga ancora.
• Urina-raccolga per citare un contenitore sterile, la centrifugazione 20 che il min alla velocità del giri/min. 2000-3000 rimuove il surnatante, se la precipitazione comparisse, centrifuga ancora. L'operazione dell'idrotorace e riferimento fluido cerebrospinale a.
• la coltura cellulare surnatante-individua le componenti secretive, si raccoglie per citare un contenitore sterile, min di centrifugazione 20 alla velocità del giri/min. 2000-3000 per rimuovere il surnatante, individuare la composizione delle cellule, sospensione con PBS (PH7.2-7.4), concentrazione delle cellule di Dilut nelle cellule ha raggiunto 1 milione/ml, cicli di gelo-disgelo ripetuti, cellule di danno ed il rilascio delle componenti intracellulari, min di centrifugazione 20 alla velocità del giri/min. 2000-3000 rimuove il surnatante, se la precipitazione comparisse, centrifuga ancora.
• I campioni di tessuto dopo il taglio dei campioni, controllano il peso, aggiungono PBS (PH7.2-7.4), rapidamente congelato con azoto liquido, mantengono i campioni a 2-8℃ dopo la fusione, aggiungono PBS (PH7.4), omogeneizzato a mano o le smerigliatrici, min di centrifugazione 20 alla velocità del giri/min. 2000-3000 rimuovono il surnatante.
• estragga appena possibile dopo la raccolta di esemplare e secondo la letteratura pertinente e dovrebbe essere esperimento appena possibile dopo l'estrazione. Se non può, l'esemplare può essere tenuto nel ℃ -20 per conservare, Avoid ha ripetuto i cicli di gelo-disgelo.
• Non può individuare il campione che contengono NaN3, perché NaN3 inibisce HRP attivo.

Principio

Questo corredo di ELISA usa l'Panino-ELISA come il metodo. Lo stripplate di Microelisa fornito in questo corredo è stato ricoperto prima con un anticorpo specifico a IL2R. Le norme o i campioni si aggiungono ai pozzi appropriati dello stripplate di Microelisa e si sono combinati all'anticorpo specifico. Poi una perossidasi del rafano (HRP) - anticorpo coniugato specifico per IL2R si aggiunge bene ad ogni stripplate di Microelisa ed è incubata. Le componenti libere sono lavate via. La soluzione del substrato di TMB si aggiunge ad ogni pozzo. Soltanto quei pozzi che contengono IL2R e HRP hanno coniugato l'anticorpo di thrombomodulin sembreranno blu a colori e poi ingialliranno dopo l'aggiunta della soluzione di arresto. La densità ottica (OD) è misurata spettrofotometricamente ad una lunghezza d'onda di 450 nanometro. Il valore del OD è proporzionale alla concentrazione di IL2R. Potete calcolare la concentrazione di IL2R nei campioni confrontando il OD dei campioni alla curva standard.

Note:

• Immagazzini il corredo a 4°C sopra la ricevuta. Il corredo dovrebbe essere equilibrato alla temperatura ambiente prima dell'analisi. Rimuova tutte le strisce non necessarie dal piatto Anticorpo-rivestito di IL2R, risigillile in stagnola a chiusura lampo e tenga a 4°C.
• I precipitati possono comparire nell'amplificatore lavante concentrato. Riscaldi prego l'amplificatore per dissolvere tutti i precipitati, che non colpiranno i risultati.
• La pipetta accurata dovrebbe essere utilizzata per evitare l'errore sperimentale. I campioni dovrebbero aggiungersi al Microplate in meno di 5 minuti. Se tantissimi campioni sono inclusi, la pipetta del canale multiplo è raccomandata.
• La curva standard dovrebbe essere inclusa in ogni analisi. I pozzi ripiegati sono raccomandati. Se il valore del OD del campione è maggior del primo pozzo delle norme, diluisca prego il campione (tempi di n) prima della prova. Nel calcolare la concentrazione originale di thrombomodulin, moltiplichi prego il fattore totale di diluizione (XnX5).
• Per evitare la contaminazione trasversale, i sigillatori di Microplate sono per uso di una volta soltanto.
• Tenga prego il substrato a partire da luce.
• Tutta l'operazione dovrebbe essere accordo con le istruzioni del produttore rigorosamente. I risultati determinati dal lettore del piatto di microtitolo.
• Tutti i campioni, lavando l'amplificatore e gli sprechi dovrebbero essere trattati come gli agenti infettante.
• I reagenti dai lotti differenti non dovrebbero essere mescolati.