|
Dettagli:
|
| Scopo: | per uso di ricerca SOLTANTO | Stoccaggio: | 2-8℃ |
|---|---|---|---|
| Specificazione: | 48wells/96wells | Metodo: | Sandwich |
| Gatto. No.: | In-Mo1153 | Cv (%): | SD/meanX100 |
| Evidenziare: | E Cadherin Elisa Kit,Topo E cad Elisa Kit,Ricerca E Cadherin Elisa Kit |
||
Topo E-Cadherin, E-cad ELISA Kit
Questo corredo di ELISA usa l'Panino-ELISA come il metodo. Lo stripplate di Microelisa fornito in questo corredo è stato ricoperto prima con un anticorpo specifico aE-cad. Le norme o i campioni si aggiungono ai pozzi appropriati dello stripplate di Microelisa e si sono combinati all'anticorpo specifico. Poi una perossidasi del rafano (HRP) - anticorpo coniugato specifico per E-cad si aggiunge bene ad ogni stripplate di Microelisa ed è incubata. Le componenti libere sono lavate via. La soluzione del substrato di TMB si aggiunge ad ogni pozzo. Soltanto quei pozzi che contengono il E-cad e l'anticorpo coniugato HRP E-cad sembreranno blu a colori e poi ingialliranno dopo l'aggiunta della soluzione di arresto. La densità ottica (OD) è misurata spettrofotometricamente ad una lunghezza d'onda di 450 nanometro. Il valore del OD è proporzionale alla concentrazione di E-cad. Potete calcolare la concentrazione di E-cad nei campioni confrontando il OD dei campioni alla curva standard.
Materiali forniti del corredo
| Materiali forniti del corredo | 48 determinazioni | 96 determinazioni | Stoccaggio | |
| 1 | Manuale dell'utente | 1 | 1 | R.T. |
| 2 | Membrana del piatto di chiusura | 2 | 2 | R.T. |
| 3 | Borse sigillate | 1 | 1 | R.T. |
| 4 | Stripplate di Microelisa | 1 | 1 | 2-8℃ |
| 5 | Norma: 108pg/ml | bottiglia 0.5ml×1 | bottiglia 0.5ml×1 | 2-8℃ |
| 6 | Diluente standard | bottiglia 1.5ml×1 | bottiglia 1.5ml×1 | 2-8℃ |
| 7 | Reagente del HRP-coniugato | bottiglia 3ml×1 | bottiglia 6ml×1 | 2-8℃ |
| 8 | Diluente del campione | bottiglia 3ml×1 | bottiglia 6ml×1 | 2-8℃ |
| 9 | Soluzione A del cromogeno | bottiglia 3ml×1 | bottiglia 6ml×1 | 2-8℃ |
| 10 | Soluzione B del cromogeno | bottiglia 3ml×1 | bottiglia 6ml×1 | 2-8℃ |
| 11 | Fermi la soluzione | bottiglia 3ml×1 | bottiglia 6ml×1 | 2-8℃ |
| 12 | Soluzione del lavaggio | 20ml (20X) ×1bottle | 20ml (30X) ×1bottle | 2-8℃ |
Procedura
Diluizione delle norme
i pozzi 1.Ten sono messi per le norme in uno stripplate di Microelisa. In bene 1 e bene in 2, l'amplificatore standard della soluzione tipo 100μl e di diluizione 50μl si aggiunge bene e mescolato. In bene 3 e bene in 4, la soluzione 100μl da bene 1 e 2 si aggiunge bene rispettivamente. Poi l'amplificatore standard di diluizione 50μl si aggiunge e mescolato bene. la soluzione 50μl è scartata dai pozzi 3 e bene 4. In bene 5 e bene in 6, la soluzione 50μl da bene 3 e 4 si aggiunge bene rispettivamente. Poi l'amplificatore standard di diluizione 50μl si aggiunge e mescolato bene. In bene 7 e bene in 8, la soluzione 50μl da bene 5 e 6 si aggiunge bene rispettivamente. Poi l'amplificatore standard di diluizione 50μl si aggiunge e mescolato bene. In bene 9 e bene in 10, la soluzione 50μl da bene 7 e 8 si aggiunge bene rispettivamente. Poi l'amplificatore standard di diluizione 50μl si aggiunge e mescolato bene. la soluzione 50μl è scartata dai pozzi 9 e bene 10. Dopo diluizione, il volume totale in tutti i pozzi è 50μl e le concentrazioni sono 24ng/ml, 16 ng/ml, 8 ng/ml, 4ng/ml e 2ng/ml, rispettivamente.
2. Nello stripplate di Microelisa, lasci un pozzo vuoto come controllo in bianco. In pozzi del campione, l'amplificatore di diluizione del campione 40μl e campione 10μl si aggiunge (il fattore di diluizione è 5). I campioni dovrebbero essere caricati sul fondo senza toccare la parete buona. Mescoli bene con l'agitazione delicata.
3. Incubazione: incubi il min 30 a 37℃ dopo sigillato con la membrana del piatto di chiusura.
4. Diluizione: diluisca l'amplificatore lavante concentrato con acqua distillata (30 volte per 96T e 20 volte per 48T).
5. Lavaggio: peli con attenzione la membrana del piatto di chiusura, aspiri e riempia con la soluzione del lavaggio. Scarti la soluzione del lavaggio dopo il riposo per 30 secondi. Ripeti la procedura lavante per 5 volte.
6. Aggiunga bene il reagente del HRP-coniugato di 50 μl ad ogni pozzo eccetto il controllo in bianco.
7. Incubazione come descritto in punto 3.
8. Lavaggio come descritto in punto 5.
9. Coloritura: Aggiunga la soluzione A del cromogeno di 50 μl e la soluzione la B ad ogni pozzo, miscela del cromogeno di 50 μl con delicatamente l'agitazione ed incubi a 37℃ per 15 minuti. Eviti prego la luce durante la coloritura.
10. Termine: aggiunga 50 che il μl ferma la soluzione ad ogni pozzo per terminare la reazione. Il colore nel pozzo dovrebbe cambiare dal blu per ingiallire.
11. Capacità di assorbimento colta O.D. a 450nm facendo uso di un lettore del piatto di microtitolo. Il valore del OD del controllo in bianco è fissato bene come zero. L'analisi dovrebbe essere effettuata in 15 minuti dopo l'aggiunta ferma la soluzione.
Precisione
precisione di Intra-analisi (precisione all'interno di un'analisi): 3 campioni con E-cad basso, medio ed ad alto livello sono stati provati 20 volte su un piatto, rispettivamente.
precisione di Inter analisi (precisione fra le analisi): 3 campioni con E-cad basso, medio ed ad alto livello sono stati provati su 3 piatti differenti, 8 repliche in ogni piatto.
Cv (%) = SD/meanX100
Intra-analisi: Cv<10>
Inter analisi: Cv<12>
Gamma di analisi
0.6pg/ml -80pg/ml
Sensibilità:
0,1 pg/ml
Persona di contatto: Mr. Steven
Telefono: +8618600464506
