Ferritina umana, Fe ELISA Kit
Materiali forniti del corredo
| |
Materiali forniti del corredo |
48 determinazioni |
96 determinazioni |
Stoccaggio |
| 1 |
Manuale dell'utente |
1 |
1 |
R.T. |
| 2 |
Membrana del piatto di chiusura |
2 |
2 |
R.T. |
| 3 |
Borse sigillate |
1 |
1 |
R.T. |
| 4 |
Stripplate di Microelisa |
1 |
1 |
2-8℃ |
| 5 |
Norma: 36ng/ml |
bottiglia 0.5ml×1 |
bottiglia 0.5ml×1 |
2-8℃ |
| 6 |
Diluente standard |
bottiglia 1.5ml×1 |
bottiglia 1.5ml×1 |
2-8℃ |
| 7 |
Reagente del HRP-coniugato |
bottiglia 3ml×1 |
bottiglia 6ml×1 |
2-8℃ |
| 8 |
Diluente del campione |
bottiglia 3ml×1 |
bottiglia 6ml×1 |
2-8℃ |
| 9 |
Soluzione A del cromogeno |
bottiglia 3ml×1 |
bottiglia 6ml×1 |
2-8℃ |
| 10 |
Soluzione B del cromogeno |
bottiglia 3ml×1 |
bottiglia 6ml×1 |
2-8℃ |
| 11 |
Fermi la soluzione |
bottiglia 3ml×1 |
bottiglia 6ml×1 |
2-8℃ |
| 12 |
Soluzione del lavaggio |
20ml (20X) ×1bottle |
20ml (30X) ×1bottle |
2-8℃ |
Procedura
Diluizione delle norme
i pozzi 1.Ten sono messi per le norme in uno stripplate di Microelisa. In bene 1 e bene in 2, l'amplificatore standard della soluzione tipo 100μl e di diluizione 50μl si aggiunge bene e mescolato. In bene 3 e bene in 4, la soluzione 100μl da bene 1 e 2 si aggiunge bene rispettivamente. Poi l'amplificatore standard di diluizione 50μl si aggiunge e mescolato bene. la soluzione 50μl è scartata dai pozzi 3 e bene 4. In bene 5 e bene in 6, la soluzione 50μl da bene 3 e 4 si aggiunge bene rispettivamente. Poi l'amplificatore standard di diluizione 50μl si aggiunge e mescolato bene. In bene 7 e bene in 8, la soluzione 50μl da bene 5 e 6 si aggiunge bene rispettivamente. Poi l'amplificatore standard di diluizione 50μl si aggiunge e mescolato bene. In bene 9 e bene in 10, la soluzione 50μl da bene 7 e 8 si aggiunge bene rispettivamente. Poi l'amplificatore standard di diluizione 50μl si aggiunge e mescolato bene. la soluzione 50μl è scartata dai pozzi 9 e bene 10. Dopo diluizione, il volume totale in tutti i pozzi è 50μl e le concentrazioni sono 24ng/ml, 16 ng/ml, 8 ng/ml, 4ng/ml e 2ng/ml, rispettivamente.
2. Nello stripplate di Microelisa, lasci un pozzo vuoto come controllo in bianco. In pozzi del campione, l'amplificatore di diluizione del campione 40μl e campione 10μl si aggiunge (il fattore di diluizione è 5). I campioni dovrebbero essere caricati sul fondo senza toccare la parete buona. Mescoli bene con l'agitazione delicata.
3. Incubazione: incubi il min 30 a 37℃ dopo sigillato con la membrana del piatto di chiusura.
4. Diluizione: diluisca l'amplificatore lavante concentrato con acqua distillata (30 volte per 96T e 20 volte per 48T).
5. Lavaggio: peli con attenzione la membrana del piatto di chiusura, aspiri e riempia con la soluzione del lavaggio. Scarti la soluzione del lavaggio dopo il riposo per 30 secondi. Ripeti la procedura lavante per 5 volte.
6. Aggiunga bene il reagente del HRP-coniugato di 50 μl ad ogni pozzo eccetto il controllo in bianco.
7. Incubazione come descritto in punto 3.
8. Lavaggio come descritto in punto 5.
9. Coloritura: Aggiunga la soluzione A del cromogeno di 50 μl e la soluzione la B ad ogni pozzo, miscela del cromogeno di 50 μl con delicatamente l'agitazione ed incubi a 37℃ per 15 minuti. Eviti prego la luce durante la coloritura.
10. Termine: aggiunga 50 che il μl ferma la soluzione ad ogni pozzo per terminare la reazione. Il colore nel pozzo dovrebbe cambiare dal blu per ingiallire.
11. Capacità di assorbimento colta O.D. a 450nm facendo uso di un lettore del piatto di microtitolo. Il valore del OD del controllo in bianco è fissato bene come zero. L'analisi dovrebbe essere effettuata in 15 minuti dopo l'aggiunta ferma la soluzione.
Precisione
precisione di Intra-analisi (precisione all'interno di un'analisi): 3 campioni con la ferritina umana bassa, media ed ad alto livello (Fe) sono stati provati 20 volte su un piatto, rispettivamente.
precisione di Inter analisi (precisione fra le analisi): 3 campioni con la ferritina umana bassa, media ed ad alto livello (Fe) sono stati provati su 3 piatti differenti, 8 repliche in ogni piatto.
Cv (%) = SD/meanX100
Intra-analisi: Cv<10>
Inter analisi: Cv<12>
Gamma di analisi
0.4ng/ml-25ng/ml
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